Resumo

Atualmente, existe um grande interesse por fungos endofíticos devido ao seu potencial para produção de compostos de importância biotecnológica. Entretanto, ainda existe uma grande lacuna acerca do conhecimento das vias de biossíntese desses compostos. O fungo endofítico Epicoccum nigrum é um habitante comum dos tecidos de cana-de-açúcar e outras plantas hospedeiras e é conhecido por ser um produtor de compostos de importância biotecnológica. Recentemente foi descrita uma nova molécula produzida por E. nigrum que possui atividade antimicrobiana, a epicolactona. Este composto possui um esqueleto de carbono incomum e pertence à família das lactonas do ácido resorcílico - RALs (classe dos policetídeos). Tendo em vista a importância do estudo de novos compostos com atividade biológica e das respectivas vias biossintéticas, esse trabalho teve como objetivo avaliar genes possivelmente envolvidos na via de biossíntese da epicolactona. Transformantes de E. nigrum (obtidos por mutagênese insercional aleatória mediada por Agrobacterium tumefaciens) que perderam a capacidade de síntese da epicolactona foram analisados quanto a presença de genes na região de inserção do T-DNA. Dois genes que codificam policetídeos sintases (PKSs) identificados no genoma sequenciado também foram analisados. O programa AUGUSTUS foi utilizado para predição de genes e proteínas e localização de íntrons. As proteínas preditas foram analisadas contra o banco de dados Pfam e do GenBank. Oligonucleotídeos foram desenhados com o programa Primer3. Os genes identificados codificam uma citotromo P450 oxidoredutase, uma lacase (com três domínios Cu-oxidase) e um fator de transcrição. As proteínas preditas possuem domínios conservados característicos e apresentam similaridade com proteínas de outros fungos. A análise dos domínios das PKSs mostrou que essas proteínas consistem de uma PKS altamente redutora e uma PKS não redutora transcritas divergentemente a partir de uma região comum, organização característica de PKSs relacionadas com a síntese de RALs. Assim, é provável que estejam envolvidas com a síntese da epicolactona. As análises in silico indicam que as enzimas são funcionais. Esse trabalho contribui para o conhecimento de genes de biossíntese de metabólitos secundários em Epicoccum nigrum. O trabalho prosseguirá com a confirmação da função e análise da expressão gênica.