Resumo

Fungos entomopatogênicos, como M. anisopliae, são capazes de controlar diversas pragas agrícolas. Para um controle eficiente, é necessário selecionar microrganismos com grande potencial de patogenicidade e virulência. Portanto, a avaliação de diferentes parâmetros biológicos e bioquímicos, como o tempo de mortalidade, concentração letal, produção de enzimas e metabolitos, são importantes. A produção de quitinases está relacionada com a patogenicidade e virulência. Sendo assim, o objetivo deste estudo foi analisar a produção de quitinases pelas linhagens IBCB 360 e IBCB 384 de M. anisopliae. As linhagens foram cultivadas em FSS utilizando 4 g de crisálida do Bombyx mori (bicho da seda) seca e triturada como substrato, umedecido com diferentes soluções (água da torneira, solução de extrato de levedura, solução salina SR ou solução de sal de Khanna) (3:01 m/v). A produção enzimática foi otimizada por um planejamento experimental 22 usando o DCCR considerando o tempo de cultivo e a umidade do meio como variáveis independentes. As análises estatísticas e as superfícies de resposta foram obtidas utilizando o software Statistica 8.0. A atividade enzimática foi determinada usando 1 mM de 4-nitrofenil N-acetil-β-D-glucosaminide como substrato em 100 mM de tampão de acetato de sódio, pH 5,0. As condições otimizadas para produção de quitinase foram de 9-12 dias e de 48% a 72% de umidade para ambas as linhagens. O pH e temperatura ótima de atividade para a quitinase da linhagem IBCB 360 foi de 5,0 e 60 ° C, respectivamente e para linhagem IBCB 384 foi de 5,5 e 60 ° C, respectivamente. A quitinase do IBCB 360 foi estável em pH 6,0 e apresentou meia vida (t50) de 5 min. a 60°C, enquanto que a quitinase do IBCB 384 foi estável em uma ampla faixa de pH, com t50 de 10 min a 60 ° C. A atividade enzimática produzida pela linhagem IBCB 360 foi ativada na presença de KH2PO4 de (47%) e a linhagem IBCB 384 na presença de MnCl2 (101%). Ambas as enzimas foram inibidas por Zn(NO3). Portanto, as linhagens investigadas diferem na quantidade de quitinase secretada, sendo a produção enzimática pela linhagem IBCB 360 cerca de 1,6 vezes superior a observada para a linhagem IBCB 384. Além disso, os resultados destacam as características bioquímicas diferentes, entre as enzimas de ambas as linhagens, indicando também a diferença no potencial de patogenicidade que estes isolados possuem.