Resumo

INTRODUCCIÓN: La extracción líquido-líquido en sistemas micelares de dos fases acuosas (SMDFAs) es una metodología que ya ha demostrado resultados satisfactorios en cuanto a la integración de procesos de purificación como clarificado, concentrado y enriquecimiento de diversas biomoléculas. En este marco, el objetivo de este trabajo fue desarrollar estrategias separativas sencillas y económicas para la extracción de un fragmento de anticuerpo simple cadena (scFv) anti-LDL electronegativa a partir de Pichia pastoris, empleando SMDFAs formados por Tritón-X114 y medio de cultivo de levadura. MATERIALES Y MÉTODOS: En primer lugar, fueron determinadas las correspondientes curvas de coexistencia para aquellos sistemas micelares formados por el detergente no iónico Tritón X-114 y diferentes proporciones de medio de cultivo de Pichia pastoris (30, 60 y 90% mt). Se analizó además el efecto de diferentes variables como la presencia de sales (NaCl, MgSO4 y KI) y de los ligandos Cibacron Blue F3GA (CB) y FabsorbentTM F1P (HF) sobre la temperatura de separación de fases (Tsep). RESULTADOS: La temperatura de separación de fases por parte de los sistemas estudiados resultó ser inferior a 40°C en la mayoría de los casos ensayados y altamente dependiente de las variables estudiadas. Por un lado, a medida que fue incrementada la proporción de cultivo de levadura en los sistemas, Tsep disminuyó abruptamente, siendo cercana a 10°C para una masa de cultivo igual al 90% del total del sistema. Resultados similares fueron observados para el agregado de NaCl, MgSO4, CB y HF en concentraciones comprendidas en el rango de los 0,005 y 5% de la masa total. Por otro lado, aquellos sistemas que contenían KI, mostraron un notorio incremento en sus respectivas Tsep. CONCLUSIÓN: Debido a las bajas temperaturas de separación de fases y a la alta proporción de medio de cultivo que fue posible incorporar a los sistemas, los SMDFAs en estudio fueron considerados apropiados para ser aplicados a la extracción de anticuerpos recombinantes directamente a partir de medio fermentado de Pichia pastoris. Por otro lado, estos resultados dejan abierta la perspectiva para un futuro ensayo de extracción fermentativa.