Resumo

A regulação da produção de micotoxinas por fungos é um processo complexo guiado por fatores ambientais e planta hospedeira, sendo que a maioria deles não está completamente esclarecida. Nos últimos anos, a complexidade dos mecanismos regulatórios de metabólitos secundários fúngicos tem tido destaque, com desenvolvimento de tecnologias como PCR por Tempo Real e o aumento do banco de dados. Este trabalho estudou a expressão gênica e produção de aflatoxina B1 de Aspergillus flavus. Para esta avaliação, uma cepa de Aspergillus flavus produtora de aflatoxina B1 foi inoculada (100 µL de solução com 10⁶ esporos/mL) em meio amendoim e ágar coco e incubada a 25°C por 10 dias. Um total de 8 genes envolvidos na produção do metabólito secundário (Afl Q, Afl M, Afl O, Afl P, Lae A, ppo A, ppo C, e Metaloprotease) foi analisado por PCR em Tempo Real e comparados com a presença de aflatoxina B1, analisada por Cromatografia em camada delgada (CCD). Dois períodos foram eleitos (2 e 5 dias de cultivo) para confrontar os dados da expressão dos genes com a produção da toxina. Pelos resultados obtidos, verificamos que no meio ágar coco todos os genes, com exceção do Afl Q, foram mais expressos no 2° dia, quando comparados ao dia 5 de cultivo. Também observamos que no dia 2, o gene com maior expressão foi o ppo A, seguido pelo Lae A e no dia 5, os mais expressos foram Afl Q e Lae A. No meio amendoim todos os genes, com exceção do Afl Q, foram mais expressos no dia 2, sendo que a expressão de metaloprotease foi maior (100%) nos dois períodos analisados. O gene LaeA tem função regulatória do metabolismo secundário, os genes ppo estão relacionados com a presença de lipídeos e a metaloprotease com as proteínas do substrato. A menor expressão do gene Afl Q no dia 2 pode ser justificada pela atuação desse gene no final da via de biossíntese da toxina. A produção de aflatoxina B1 foi observada no meio ágar coco a partir do 3° dia e no meio amendoim a partir do 4°dia, sendo a toxina detectada até o 10° dia de cultivo. Os resultados obtidos indicaram que a maioria dos genes envolvidos na biossíntese de aflatoxina, apresenta maior expressão no início da incubação do fungo no substrato e como conseqüência a produção de aflatoxina B1 é comprovada por CCD a partir do dia 3, no Agar coco e dia 4, no meio amendoim. No dia 5, os genes já estavam expressando menos, com exceção do gene Afl Q.