Resumo

A presença de aflatoxinas (AF) constitui dificuldade na exportação de castanhas-do-Brasil e Aspergillus flavus é um importante fungo produtor de AF neste substrato. A detecção e quantificação da expressão de genes relacionados à biossíntese de micotoxinas é uma ferramenta útil no estudo da capacidade genética e de identificação de fatores que influenciem sua produção. PCR em tempo real (qPCR) garante rapidez da análise, alta especificidade e propicia a quantificação da expressão dos genes propostos. O presente estudo objetivou análise transcricional por qPCR dos principais genes pertencentes ao cluster da via de biossíntese de AF por A. flavus (aflM, aflO, aflP e aflQ), envolvidos no catabolismo de proteínas (metaloprotease), síntese de oxipilinas (ppoA e ppoC) e regulação do metabolismo secundário geral (LaeA). As análises foram realizadas em diferentes estágios de crescimento de A. flavus: 2 e 5 dias de incubação a 25 ºC, e em dois meios de cultura: ágar coco e ágar castanha-do-Brasil. Os transcritos de todos os genes foram comparados paralelamente à produção de AF, realizadas por cromatografia em camada delgada. A análise aflatoxigênica não revelou detecção de AF com 2 dias de incubação, mas após 5 dias AF foram detectadas. O gene ppoA foi o mais expresso em ambos meios de cultura no período de incubação inicial, e estudos indicam participação de oxipilinas no crescimento fúngico e produção de AF. Após 5 dias de incubação, os genes AflQ e metaloprotease foram os mais expressos no ágar coco e castanha-do-brasil, respectivamente. A expressão do gene metaloprotease parece estar mais relacionada com o meio ágar castanha-do-Brasil do que com ágar coco. Em relação aos genes pertencentes ao cluster de biossíntese de AF, todos foram mais expressos em ágar coco, e as diferenças entre o percentual de expressão entre os dois meios de cultura foi menos acentuada com 2 dias de incubação. O presente trabalho demonstrou que a castanha-do-brasil consiste em um substrato propício para produção de AF e expressão dos genes envolvidos direta e indiretamente na sua síntese. Dado os graves efeitos da contaminação por AF na saúde e economia, um melhor conhecimento dos mecanismos regulatórios da síntese de AF durante infecção de castanhas-do-Brasil por A. flavus é fundamental para o desenvolvimento de novas biotecnologias associadas à prevenção e redução da contaminação.