Resumo

O gênero Burkholderia abrange diversas espécies de bactérias gram-negativas, na forma de bacilos, que apresentam uma variedade de aplicações biotecnológicas. A proteômica é um novo campo de estudo que se propõe analisar de forma global o conjunto de proteínas expressas. O objetivo deste trabalho foi obter o perfil proteico de Burkholderia sp. SMF 07 cultivada em meio nutritivo suplementado ou não com fenol e buscar proteínas que estão relacionadas à biodegradação do fenol. O método de obtenção das proteínas intracelulares utilizado neste trabalho foi realizado conforme Riedel e colaboradores (2006) com algumas modificações. A indução da expressão das proteínas foi realizada através da adição de 1000 mg/ mL de fenol (grupo fenol), usando um grupo controle. A amostra de proteínas intracelulares obtida foi quantificada pelo método de Bradford e a pureza das proteínas foi verificada pelo padrão de bandas em SDS-PAGE. Em seguida as amostras foram analisadas por eletroforese bidimensional (2D). A identificação das proteínas foi feita através do ExPASy Proteomics Server e a análise estatística pela aplicação do teste Mann-Whitney p < 0,05). A concentração das proteínas foi de 8,2 e 7,5 μg/μl para o grupo controle e fenol, respectivamente, e as bandas em SDS-PAGE se apresentaram bem definidas e livres de possíveis contaminantes. Os grupos controle e fenol apresentaram um número médio de 615 e 428 spots, respectivamente. Ou seja, ocorreu uma redução significativa no número médio de spots no grupo fenol em relação ao grupo controle (30%). Em relação à distribuição dos spots por ponto isoelétrico (pI) e massa molecular (MM), foi possível constatar que o número de spots do grupo fenol reduziu em todos os intervalos de pI e MM em relação ao grupo controle. Foi observado um maior número de spots no intervalo de pI entre 5,1 a 7 e na faixa de MM entre 20-40 kDa, tanto no grupo controle como no fenol. Foi possível verificar que a proteína 4-hidroxi-2-oxovalerato aldolase, uma enzima envolvida na via meta de degradação do fenol, apresentou expressão quantitativa aumentada na presença do fenol. A partir dos dados obtidos pode-se concluir que o protocolo de extração de proteínas utilizado nesse trabalho foi eficiente, pois permitiu a obtenção de géis bidimensionais com boa resolução e reprodutibilidade e a identificação de proteínas envolvidas na biodegradação do fenol.