Resumo

A alta diversidade metabólica encontrada nos micro-organismos de manguezais, adaptados as mais diversas condições ambientais e muitas vezes sob pressão biótica e abiótica, pode facilitar a aquisição de enzimas adequadas a processos industriais e biotecnológicos. A metagenômica tornou-se ferramenta significante para obtenção de genes e enzimas de interesse biotecnológico, dificilmente obtidos através do cultivo tradicional de micro-organismos. A partir de uma biblioteca metagenômica de solo de manguezal da Baía de Camamu – BA foram realizados ensaios laboratoriais com intenção de detectar atividades de hidrolases, nesta foram encontrados alguns clones positivos para atividade de protease. Sendo assim o objetivo deste trabalho foi realizar screenings enzimáticos para detecção de atividade protease frente a vários substratos proteicos, bem como avaliar a sua atividade via eletroforese em gel de poliacrilamida. Para tanto, o clone foi crescido em meio LB-broth líquido contendo leite 1 %, arabinose 0,01 % e cloranfenicol 12,5 µg/mL por 48 horas a 37 ºC, após esse período as células foram retiradas por centrifugação e o sobrenadante precipitado com sulfato de amônio 90 % sob agitação. O precipitado foi recuperado em tampão Tris-HCl 20 mM, pH 8.0, seguido de diálise por 24 horas. O teste de atividade foi feito pelo método de zonas de hidrólise em tampão sólido contendo 1% de gelatina, hemoglobina, gema de ovo e leite. Foi detectado halo de degradação em todos os substrato testados, vale ressaltar que no substrato do sangue o halo escuro caracteriza uma α-hemólise, perda parcial de hemoglobina pelas hemácias. Paralelamente o extrato foi aplicado ao gel de poliacrilamida nativo 10% (sem SDS), contendo albumina (copolimerizada) 1% no gel de separação. A atividade protease foi detectada pelo rastro de degradação mostrado no gel após coloração com comassie blue. Nas indústrias, as proteases são conhecidas como o grupo de maior aplicação, possuindo papel fundamental na fabricação de cervejas, maturação de queijos, aproveitamento de resíduos entre outros. De maneira geral a preferencia aos micro-organismos deve-se ao fato do seu rápido crescimento e ao pequeno espaço requerido para o seu cultivo e também a grande variedade das atividades catalíticas.