Resumo

Introdução: O herpesvírus associado ao sarcoma de Kaposi (KSHV) é um herpesvírus gama associado ao desenvolvimento de cânceres humanos, notadamente o sarcoma de Kaposi (SK). Dentre seus produtos virais destaca-se a proteína K1, que aumenta a sobrevivência e proliferação da célula infectada pela interferência em vias intracelulares de sinalização. A ORF-K1 viral apresenta elevada variabilidade, de modo a discriminar diferentes genótipos do KSHV. Até o momento não se sabe se diferentes genótipos virais apresentam características biológicas próprias, com reflexos no potencial cancerígeno do KSHV. Objetivos: Contribuir na avaliação da hipótese de que diferentes formas de KSHV K1 causam efeitos biológicos distintos na célula em que é expressa. Para tanto, vetores recombinantes contendo a ORF-K1 de genótipos virais A, B e C foram gerados. Métodos: A ORF-K1 de diferentes genótipos virais foi obtida a partir do DNA de linhagens de linfoma de efusão primária (PEL) constitutivamente infectadas pelo KSHV. O amplicon da ORF-K1 gerado por PCR e vetor comercial que codifica o epítopo FLAG foram então digeridos, ligados e clonados em bactéria E. coli cepa DH5 α. Clones selecionados foram então validados por meio de sequenciamento automatizado de DNA. Um clone validado de cada vetor recombinante foi transfectado em células HEK293 e a expressão de K1 foi avaliada por Western blot (WB). Resultados e discussão: O sequenciamento de DNA demonstrou que a ORF-K1 dos vetores recombinantes corresponde a de sequências-protótipo depositadas de linhagens de PEL. A presença de K1 no lisado de células HEK293 transfectadas foi demonstrada por WB com anticorpo contra o epítopo FLAG fusionado à proteína. A análise da sequência de aminoácidos de K1 codificada nos vetores recombinantes revelou que o domínio ITAM de K1 do genótipo B apresenta quatro aminoácidos distintos em relação ao ITAM de K1 de genótipos A e C. Assim, é possível que K1 de genótipo B apresente efeitos peculiares na sinalização intracelular deflagrada por ITAM. Conclusão: Os resultados revelam que clones de vetores recombinantes de ORF-K1 de genótipos A, B e C foram produzidos e validados. Os vetores recombinantes produzidos serão úteis para se estabelecer modelo experimental para análises das propriedades biológicas da proteína K1 do KSHV. Fomento: FAPESP (Proc. AP 2009/17708-0) e CAPES