Resumo

Introdução: Dentre as espécies de Yersinia, a Y. enterocolitica é o patógeno de maior prevalência em humanos e animais. Y. enterocolitica é classificada em seis biotipos e as variedades patogênicas enquadram-se nos biotipos 1B, 2, 3, 4 e 5, sendo que no Brasil os biotipos 2 e 4 são os mais frequentemente isolados de humanos e animais doentes. O objetivo deste trabalho foi tipar molecularmente linhagens de Yersinia enterocolitica biotipo 2 isoladas de ambiente e humanos por diferentes técnicas moleculares e comparar o poder discriminatório das metodologias utilizadas. Materiais e métodos: Foram tipadas 39 linhagens de Yersinia enterocolitica biotipo 2 isoladas de ambiente (n=34) e humanos (n=5) no Brasil pelas técnicas ERIC-PCR e PFGE. Na técnica de ERIC-PCR, as amplificações foram feitas com volume final de 50µL com 100ng de DNA, 0,4mM de cada dNTP, 4mM de MgCl2, 1U de Klen Taq DNA Polimerase, 1X tampão para PCR e 20 pmol de cada primer ERIC. Somente bandas entre 300 e 5000 pb foram incluídas na análise. No PFGE, os plugs foram digeridos com 30U de XbaI. A corrida eletroforética foi feita no CHEF-DRIII com voltagem de 6 v/cm, ângulo de 120°, pulso inicial 1 segundo, pulso final 10 segundos e tempo de corrida de 29 horas. Somente bandas entre 48,5 e 242,5 kb foram incluídas na análise. Os dados foram analisados pelo software BioNumerics 5.1 e os dendrogramas de similaridade construídos pelo método UPGMA e coeficiente de similaridade DICE. O índice de discriminação (D) de cada metodologia foi calculado baseado em uma variação do índice de diversidade de Simpson. Resultados: No dendrograma de similaridade genotípica obtido pela análise de ERIC-PCR observou-se apenas um grupo predominante com todas as linhagens que apresentaram similaridade superior a 87,1%. Foram observados 34 ERIC tipos. Por sua vez, pela análise de PFGE observou-se a formação de três grupos denominados A, B e C. As 23 (58,9%) linhagens do grupo A apresentaram similaridade genotípica superior a 84,6%, as sete linhagens do grupo B similaridade superior a 90,9%, e as nove linhagens do grupo C similaridade superior a 90,1%. A similaridade entre os três grupos foi superior a 72,5%. Foram observados 27 PFGE tipos. O índice de discriminação (D) para a metodologia de ERIC-PCR foi 0,992 e para PFGE foi 0,966. Conclusão: As linhagens de Y. enterocolitica biotipo 2 mostraram-se bastante similares. A metodologia de ERIC-PCR foi um pouco mais eficiente que PFGE em discriminar as linhagens desse estudo.