Resumo

Tanase (EC. 3.1.1.20) é uma enzima que catalisa a hidrólise de ligações éster e depsídicas de taninos hidrolisáveis em glicose e ácido gálico. Diversas aplicações são dadas a tanase, como fabricação de chá instantâneo, cerveja, vinho e café. No entanto, fatores como temperatura e pH podem interferir na atividade enzimática. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito do pH e temperatura na estabilidade, bem como a concentração do substrato na atividade de tanase de Enterobacter aerogenes produzida sob fermentação submersa. Enterobacter aerogenes foi isolada da azeitona-do-nordeste (Syzygium cumini Lam.) e é mantida em caldo BHI glicerinado sob congelamento. Culturas de 24 h foram inoculadas em solução salina a 0,85 % (p/v), até obter uma suspensão com densidade ótica de 6 na escala de MacFarland. A fermentação ocorreu em Erlenmeyers contendo 25 mL de meio Czapeck-Dox (1 % de ácido tânico, pH 6,0) onde inoculou-se 10 % (v/v) de suspensão bacteriana e incubou-se a 36 ± 1 °C por 48 h/180 rpm. O ácido tânico foi esterilizado em membrana de 0,2 micrometro. Após centrifugação a 4000 rpm/15 minutos, o sobrenadante foi utilizado para ensaios de atividade. Esta foi estimada pelo método da rodanina etanólica utilizando ácido tânico como substrato. Avaliou-se o efeito do pH (3 a 9) e temperatura (50 a 90 °C) na estabilidade enzimática após 180 minutos. A cada intervalo de tempo (30 minutos) alíquotas foram retiradas e a atividade residual foi medida. A atividade no tempo 0 minutos foi considerada 100 %. Soluções de ácido tânico (0,4 a 0,6 mg/mL) foram preparadas em tampão citrato a 0,05 M (pH 5,0) e o efeito da concentração do mesmo foi determinado. Valores de Km e Vmax foram calculados. A tanase apresentou estabilidade em uma ampla faixa de valores de pH (3,0 a 9,0) e temperatura (50 a 90 °C). Após 180 minutos de pré-incubação da enzima houve uma perda na atividade residual de 5,84 % e 6,66 % no pH 3,0 e 6,0, respectivamente, e um aumento de 0,35 %, 3,04 %, 85,51 %, 20,31 % e 14,10 % no pH 4, 5, 7, 8 e 9, respectivamente. O efeito da termoestabilidade sobre a atividade residual mostrou aumento de 1,80 %, 16,90 %, 42,33 %, 208,50 % e 395,17 % após incubação de 180 minutos a 50, 60, 70, 80 e 90 °C, respectivamente. O Km da enzima para o ácido tânico foi 0,882 mg/mL com um Vmax de 2,111 U/mL. Vale ressaltar que estas propriedades dependem fortemente das condições de cultura e também da linhagem utilizada. Os resultados apresentados mostraram que a tanase produzida pela Enterobacter aerogenes teve alta estabilidade tanto em relação ao pH quanto à temperatura, podendo possuir propriedades interessantes e atraentes para a aplicação biotecnológica. No entanto, novos estudos devem ser efetuados para um melhor entendimento da mesma.