Resumo

A bactéria Bacillus thuringiensis (Bt) produz delta-endotoxinas que possuem propriedades tóxicas e podem ser usados como biopesticida. Essas toxinas estão presentes nas proteínas que formam o cristal de inclusão paraesporal, característico desta bactéria. Isolar o cristal é uma boa forma de impedir que outras toxinas, presentes na bactéria, interfiram em trabalhos de toxicidade a espécie em estudo. Com o objetivo de realizar ensaios de toxicidade com proteínas específicas no controle da lagarta-da-soja (Anticarsia gemmatalis) principal praga desta cultura, quatro novos isolados foram cultivados em meio Usual Glicosado, por aproximadamente 4 dias, a 28 ± 2°C e 180 rpm até a obtenção de 90 % de lise celular. O material crescido foi centrifugado e as suspensões contendo esporos, cristais e células foram homogeneizados em tampão fosfato, pH 6,0 + 100 mM PMSF e lavadas 3 vezes por centrifugações de 9.000 rpm a 4°C por 10 min. Em seguida as suspensões foram lavadas consecutivamente com tampão fosfato + NaCl por centrifugações de 9.000 rpm por 10 min até retirada total do substrato sobrenadante. Para análise comparativa 15 μL da cultura bacteriana e 15 μL das proteínas Cry semipurificadas foram analisados em SDS-PAGE 10% e corados com Coomassie blue. O peso molecular foi estimado por comparação com o marcador Hig Range (Gibco-BRL) e os perfis proteicos comparadas com a cepa conhecida como Bt Kurstaki HD1. Na análise, três isolados apresentaram pesos protéicos que variaram entre 60 e 160 KDa nas amostras da cultura de Bt e na semi-purificação dos cristais. Estes valores são esperados para proteínas sintetizados por genes cry conhecidas com propriedades tóxicas a esta espécie. Os perfis apresentaram-se com diferentes pesos quando comparados antes e após as lavagens com o tampão. Além disso, os três isolados apresentaram variadas bandas pequenas com baixo peso molecular que pode ser devido à degradação das proteínas que forma o cristal de Bt. Apenas um isolado não apresentou marcação, o que pode estar relacionado com a baixa produção de proteína por este isolado. O espectro de ação de diferentes isolados de Bt depende da combinação das proteínas Cry presentes no cristal, o que torna importante à toxicidade específica, favorecendo a produção de biopesticidas e fonte de genes para construção de plantas transgênicas resistentes ao ataque de insetos.