Resumo

O Brasil é mundialmente reconhecido como um dos países mais avançados na exploração da fixação biológica de nitrogênio, possuindo grande experiência na geração de tecnologias com este processo, a partir de uma vasta diversidade bacteriana existente. A classificação taxônomica e a descrição de novas espécies possibilitam o aprofundamento das pesquisas com bactérias diazotróficas. Recentemente, a análise de vários genes “housekeeping” concatenados, denominada de análise de sequências de multilocus (MLSA) que se baseia em iniciadores para genes tais como rpoB (que codifica a subunidade beta da RNA polimerase de procarioto), dnaK (que codifica para dnaK, uma proteína de resposta a choque térmico), recA (que codifica para recombinase A), glnII (que codifica para glutamina sintetase) dentre outros, tem se mostrado útil para a identificação e resolução de espécies e subespécie bacterianas. Nesse sentido, o presente trabalho teve por objetivo caracterizar os genes de manutenção de dez estirpes de Bradyrhizobium sp (BR3306, BR3307, BR3309, BR3310, BR3315, BR3321, BR3323, BR3351, BR3352 e BR3361) isoladas de caupi, a fim de definir a espécie a qual cada um pertence. Os genes rpoB, glnII, dnaK e recA foram amplificados com iniciadores específicos e os fragmentos obtidos pela amplificação por PCR foram purificados e sequenciados em sequenciador MEGABACE. As sequências obtidas foram comparadas com as presentes no banco de dados GenBank, utilizando-se a ferramenta BLAST-N e também o banco de dados RDPII para a identificação das sequências mais próximas. As sequências produzidas nos sequenciamentos e aquelas de diferentes espécies de Bradyrhizobium foram alinhadas usando o programa ClustalX. A classificação filogenética foi deduzida usando-se o método de “neighbor-joining” a partir de uma matriz de distância gerada a partir do alinhamento com a ajuda do programa MEGA 4. A análise de agrupamento das sequências obtidas apontam que as dez estirpes de Bradyrhizobium sp formam um grupo separado das demais espécies já caracterizadas. Os resultados sugerem que as estirpes podem pertencer a uma ou mais espécies novas e devem ser caracterizadas mais detalhadamente por meio de métodos bioquímicos e genotípicos que avaliem o seu genoma.