Resumo

Introdução: O surgimento de biofilmes microbianos traz hoje sérios problemas de saúde pública, uma vez que, existem evidencias científicas de que quando associados estes micro-organismos se mostram resistentes aos tratamentos disponíveis, sobretudo devido a alterações em fatores de virulências, como por exemplo, em enzimas de adesão. Lipases podem apresentar especificidade para polímeros presentes na estrutura de biofilmes. O objetivo deste estudo foi analisar a capacidade da lipase fúngica causar alterações em enzimas degradativas específicas, fosfolipase e aspartil-proteinase, consideradas fatores de virulência em biofilme de Candida albicans. Material e Métodos: A lipase de Aspergillus niger (linhagem industrial) foi obtida por meio de fermentação líquida submersa (SmF). Determinou-se a concentração de proteínas pelo método de Bradford e a atividade enzimática por método utilizando p-nitrofenilpalmitato (pNPP) como substrato. O extrato bruto obtido foi fracionado com sulfato de amônio com saturação de 80%. A enzima foi deixada em contato com o biofilme de 24 h de C. albicans (ATCC 90028) por 30 min. Em seguida, as células foram recuperadas e incubadas por 7 dias em meios de cultura adquiridos comercialmente, para pesquisa de fosfolipase (Reduced Egg-Yolk Agar) e aspartil-proteinase (Reduced Bovine-Serum-Albumin Agar), realizou-se também um controle não tratado. Os testes foram realizados em triplicata. A presença das enzimas foi evidenciada pela medida da zona hialina ao redor das colônias e determinada pela razão do diâmetro da zona hialina pelo diâmetro da colônia, valor denominado Pz. Valores Pz=1 indicam falta de atividade enzimática, e valores Pz<1 indicam os graus de positividade. Resultados e Conclusões: Notou-se que não houve diferença entre as células de biofilme de C. albicans tratadas com lipase e o controle não tratado, uma vez que em ambos os casos não se evidenciou halos hialinos ao redor das colônias. Concluiu-se que apesar de a lipase ter apresentado, em nossos estudos, ação significativa na redução de biofilme de C. albicans, não houve alteração destes fatores de virulência. Estudos futuros com intuito de verificar outros possíveis mecanismos de ação desta enzima sobre biofilme de C. albicans estão em andamento.