Resumo

Proteases são enzimas que hidrolisam proteínas em peptídeos menores e aminoácidos. Possuem ampla aplicação industrial, como na fabricação de detergentes, processamento de alimentos, indústria de couro e farmacêutica. Podem ser isoladas a partir de diversas fontes como plantas, animais e microrganismos (fungos e bactérias). Em relação ao amplo número de microrganismos produtores de proteases, fungos filamentosos são muito utilizados devido ao fácil cultivo e alta produção de enzimas. O presente trabalho teve como objetivo a produção e purificação de uma protease de Aspergillus flavus. O fungo foi crescido em diferentes meios líquidos (meio Khanna, Khanna modificado, SR, M5 e M8) utilizando farelo de trigo 1% como fonte de carbono por um período de 24 a 216h sob agitação constante de 100rpm e condição estacionária à 30°C. Foram avaliados diferentes resíduos agroindustriais como fonte de carbono, influência de fonte de nitrogênio e pH do meio no intuito de otimizar a produção de proteases. Após a otimização da produção de proteases, o extrato bruto enzimático foi submetido ao processo de purificação utilizando-se uma coluna de troca-iônica CM-Celulose (2 x 6,5) pré-equilibrada com tampão acetato de sódio 50mM pH 4,5. A melhor produção de protease (182 U/mg) foi alcançada quando o fungo foi cultivado em meio de cultura Khanna em pH 6,5 após crescimento de 96 horas sob agitação constante, utilizando-se farelo de arroz (0,75%) como fonte de carbono e sulfato de amônio (0,75%) como fonte de nitrogênio. A enzima foi purificada parcialmente 3,7 vezes com rendimento de 4,12% e atividade específica de 635 U/mg de proteína. Os resultados obtidos demonstraram que o fungo Aspergillus flavus se destaca na produção de proteases extracelular quando cultivado em resíduos agroindustriais, apresentando uma possível aplicação biotecnológica.