Resumo

As bactérias do gênero Salmonella são responsáveis por inúmeros casos de doenças transmitidas por alimentos em todo o mundo, e a detecção deste patógeno em alimentos se torna um importante aliado na prevenção destes surtos alimentares. As técnicas tradicionais de isolamento microbiológico muitas vezes não apresentam alta especificidade e confiabilidade, portanto, se torna necessário o desenvolvimento de técnicas que possam aprimorar e apresentar dados mais confiáveis. O objetivo do trabalho foi realizar a técnica molecular de Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) para confirmar colônias suspeitas de Salmonella spp. As colônias foram repicadas para TSB (Tryptic Soy Broth) e foram incubadas a 37ºC por 24 horas para realização da extração de DNA pela técnica de pérolas de vidro. Após a quantificação do DNA, as amostras foram submetidas à técnica de PCR convencional em termociclador utilizando o primer hilA (CRACIUNAS et al., 2012) que é específico para o gênero Salmonella e apresenta um produto de amplificação de 413pb. Em cada tubo tipo eppendorf foram adicionados 2,5 µL buffer 10x, 25 pmol de cada primer, 200 µM de cada DNTP, 2 Mm de MgCl2, 0,75 U de Taq polimerase, 5ng.µL-1 de DNA e água ultrapura, totalizando um volume final de 25 µL. Em todas as reações, foram adicionados controles negativos, utilizando água ultrapura no lugar do DNA da amostra e, como controle positivo, utilizou-se DNA de Salmonella Typhimurium ATCC 14028 na concentração de 5ng.µL-1. A PCR foi realizada com os seguintes ciclos: 94°C/4 minutos para desnaturação inicial seguidos de 30 ciclos de 94°C/1 minuto, 63°C/1 minuto, 72°C/1 minuto e 72°C/10 minutos para a extensão final. Os produtos da PCR foram analisados em gel de agarose 1,5% onde amostras que apresentavam bandas com 413pb foram consideradas positivas para o gênero Salmonella. Das 5 colônias típicas de Salmonella spp. que apresentaram testes bioquímicos característicos do gênero, apenas 4 foram confirmadas pela PCR, ressaltando a importância da realização de técnicas moleculares para a confirmação a partir de métodos microbiológicos tradicionais, evitando assim resultados falso positivos. Conclui-se que devido à rapidez, especificidade e sensibilidade, a técnica de PCR pode ser utilizada para confirmar a presença de Salmonella spp. em alimentos.