Resumo

A ocorrência de micro-organismos produtores da enzima KPC (Klebsiella pneumoniae carbapenemase) possui importante papel no atual cenário da resistência microbiana aos antibióticos. Assim, surgiu a necessidade de novos antibióticos que atuem no combate dessas infecções. O objetivo deste trabalho foi semi-purificar metabólitos secundários produzidos por Burkholderia cepacia cepa RV1R2 e avaliar a atividade antibiótica das frações frente a cepas produtoras da enzima KPC isoladas do Hospital Universitário de Londrina, Paraná. Após padronização do método de produção dos metabólitos antimicrobianos, a cultura foi centrifugada, e o sobrenadante livre de células foi submetido à partição líquido-líquido, com uma série de solventes, de acordo com um gradiente de polaridade, para a verificação do mais adequado para a extração do composto desejado. Os extratos brutos obtidos foram submetidos a teste de atividade antibiótica por disco difusão. Os resultados revelaram que o solvente diclorometano apresentou melhor capacidade de extração de compostos com atividade antimicrobiana. A fase diclorometano (FDR) foi então submetida a processos de purificação por cromatografia em sistema automatizado Flash Agilent 971-FP (Agilent). Como fase móvel foram utilizados diferentes gradientes de hexano, diclorometano, acetato de etila e metanol. Como fase estacionária foi utilizada sílica gel 60 (coluna SF160 - Agilent). Esse processo cromatográfico resultou em 7 diferentes frações, que tiveram suas atividades testadas pelo método de bioautografia e disco difusão, frente as cepas produtoras de KPC. A fração FDR 4 foi a única que apresentou atividade, sendo então submetida a nova purificação por cromatografia, utilizando os mesmos parâmetros citados anteriormente. Essa segunda purificação resultou em 4 subfrações (FDR 4.1; 4.2; 4.3 e 4.4). Todas as frações foram testadas quanto à atividade antibiótica frente as cepas produtoras de KPC. O comportamento cromatográfico e o padrão de retenção das bandas foram avaliados por cromatografia em camada delgada. A fração FDR 4.3 apresentou zona de inibição média de 11 mm de diâmetro na concentração de 1000 µg/disco. Considerando que a FDR 4.3 se trata de um composto semi-purificado, os resultados obtidos no presente estudo indicam que com a evolução no processo de purificação a substância ativa apresentará maior capacidade de inibição, podendo no futuro ser uma nova ferramenta para controle de micro-organismos produtores da enzima KPC.