Resumo

Embora amostras de Enterococcus faecalis penicilina-resistente/ampicilina-sensível (EFPRAS) tenham sido reportadas no Brasil e em alguns países da Europa, os mecanismos moleculares que levaram a esse fenótipo incomum de resistência ainda não são conhecidos. Assim, o objetivo do presente estudo foi investigar mecanismos de resistência à penicilina e analisar a diversidade genética de amostras de EFPRAS isoladas de pacientes hospitalizados. A produção de beta-lactamase foi avaliada utilizando-se discos de cefinase. O gene pbp4 (penicillin binding protein) foi sequenciado utilizando-se o kit Big Dye Terminator (Applied Biosystems) após a amplificação do gene usando primers específicos. As sequências de nucleotídeos e de aminoácidos obtidas foram comparadas com sequências disponíveis no GeneBank. A diversidade genética foi analisada pelas técnicas de eletroforese em campo pulsado (PFGE) e de tipagem por sequenciamento de multilocus (MLST). Amostras de E. faecalis fenotipicamente sensíveis à penicilina e ampicilina (EFPSAS) também foram estudadas. Dentre as 17 amostras de EFPRAS e 14 de EFPSAS analisadas, nenhuma produziu beta-lactamase. De acordo com o sequenciamento do gene pbp4, todas as amostras de EFPRAS apresentaram a substituição de um ácido aspártico por ácido glutâmico na posição 573, em comparação com a amostra de referência (E. faecalis ATCC 29212). A mutação pontual que resultou nessa substituição está localizada no domínio de ligação à penicilina, o principal alvo dos beta-lactâmicos. Com exceção de uma amostra, todos EFPRAS apresentaram perfis de PFGE semelhantes. Por outro lado, a maioria dos EFPSAS apresentou diferentes perfis de PFGE. Seis amostras de EFPRAS foram selecionadas para realização do MLST. Quatro amostras apresentaram ST9 (sequence type) e duas apresentaram um novo ST (ST 524), ambos pertencentes ao complexo clonal 9 (CC9) caracterizado como complexo clonal de alto risco entre amostras de E. faecalis, mas ainda não relatado no Brasil. Os resultados do presente estudo sugerem que a maioria das amostras de EFPRAS analisadas são semelhantes geneticamente e que o surgimento da resistência à penicilina pode ter ocorrido devido à alteração de aminoácidos na posição 573 da PBP4. Este é o primeiro relato de que alterações de aminoácidos na PBP4 de E. faecalis poderiam resultar em uma diminuição da afinidade da penicilina G pela PBP modificada.