Poster (Painel)
| 318-1 | Efeito citotóxico de Listeria monocytogenes YFP+ frente às células epiteliais de humanos Caco-2 na presença de peptídeos antimicrobianos produzidos por Lactobacillus sakei 1 | | Autores: | Gomes BC (EESC-USP - Escola de Engenharia de São Carlos) ; Sorgi CA (FCFRP-USP - Faculdade de Ciências Farmacêuticas de Ribeirão Preto) ; Malavazi I (UFSCAR - Universidade Federal de São Carlos) ; Faccioli LH (FCFRP-USP - Faculdade de Ciências Farmacêuticas de Ribeirão Preto) ; Nomizo A (FCFRP-USP - Faculdade de Ciências Farmacêuticas de Ribeirão Preto) ; De Martinis ECP (FCFRP-USP - Faculdade de Ciências Farmacêuticas de Ribeirão Preto) |
Resumo Os peptídeos antimicrobianos possuem um grande potencial no tratamento de distúrbios clínicos e em especial, daquelas envolvendo a integridade das barreiras epiteliais. No presente trabalho, as taxas de apoptose e necrose nas células intestinais de humanos Caco-2 foram avaliadas após exposição à L. monocytogenes YFP+ 19115 e a diversas concentrações do sobrenadante bacteriocinogênico neutralizado livre de células produzido por L. sakei 1 (SNLS-1). O sobrenadante de L. sakei ATCC 15521 não produtor de bacteriocina (SNLS-A) foi empregado como controle negativo. A variação da porcentagem de células Caco-2 em apoptose na presença de L. monocytogenes YFP+ foi avaliada por Citometria de fluxo FACScan (BD Biosciences, EUA) utilizando-se o kit AnnexinV-FITC Apoptosis (BD PharmingenTM, EUA) após 2 horas de incubação. A análise por microscópica confocal (TCS SP2 Leica Microsystems, Alemanha) foi feita após 2 horas de adesão de L. monocytogenes expressando proteína fluorescente amarela (YFP+) às células Caco-2 marcadas com “MitoTracker Deep Red 633” (Invitrogen, EUA). Nas primeiras 2 horas do teste de adesão, as células Caco-2 apresentaram uma taxa de viabilidade de 74,9%, enquanto que na presença de L. monocytogenes YFP+ foi observado uma diminuição significativa da porcentagem de células Caco-2 viáveis (9%) seguido de consequente aumento da porcentagem de células em apoptose (36,3%) comparada ao controle (5,2%). Interessantemente, na presença de L. monocytogenes YFP+ foi observado um aumento da taxa de células em necrose (54,5%), que diminuíram (11,3%, 18,7% e 17%) na presença das diferentes concentrações de SNLS-1. O mesmo resultado não foi obtido quando os testes foram repetidos com o sobrenadante controle livre de bacteriocina (SNLS-A), sugerindo um possível efeito protetor conferido pela sakacina 1 frente à infecção induzida por L. monocytogenes no epitélio intestinal. Adicionalmente, o SNLS-1 amenizou a inflamação induzida por L. monocytogenes às células do epitélio intestinal, evidenciado pela redução do número de células Caco-2 em necrose. |