Resumo

No Brasil, surtos causados por micobactérias de crescimento rápido em pacientes submetidos a procedimentos invasivos têm sido descritos desde 1998. A maioria desses surtos foi causada por Mycobacterium abscessus. Em situações de surto, a tipagem molecular dos isolados auxilia a investigação epidemiológica, permitindo identificar se o surto foi causado por uma única cepa, sugerindo uma única fonte de infecção, ou por múltiplas cepas, sugerindo contaminação a partir de várias fontes. A técnica de eletroforese em campo pulsado (PFGE) é considerada padrão-ouro dentre as metodologias de tipagem molecular, mas se trata de uma técnica bastante trabalhosa e demorada e há poucos laboratórios de referência no Brasil capazes de executá-la. Neste projeto pretendemos avaliar a eficiência de um esquema de multilocus sequence typing (MLST), um método de tipagem mais específico e acessível, se comparado à técnica de PFGE, para tipagem de isolados da espécie M. abscessus. Um total de 34 isolados de M. abscessus foi estudado, sendo 18 associados a dois surtos, e 16 não relacionados com surtos. O DNA de cada isolado foi extraído por fervura a partir de colônias isoladas. Sete genes housekeeping - argH, cya, glpK, gnd, murC, pta e purH - foram amplificados de acordo com o protocolo descrito no site de MLST de M. abscessus do Instituto Pasteur (http://www.pasteur.fr/recherche/genopole/PF8/mlst/Myco-abscessus.html). Os produtos amplificados foram purificados e sequenciados. As sequências obtidas foram analisadas com o programa BioEdit, versão 7.1.11 e as sequências consenso foram submetidas ao site do Instituto Pasteur, que identifica o alelo para o gene analisado, de modo que cada isolado possui um perfil de MLST, que consiste em um conjunto de alelos, referido como sequence type (ST). Os resultados de MLST e PFGE de cada isolado foram comparados. Os isolados de cada um dos dois surtos estudados apresentaram o mesmo ST e perfis indistinguíveis de PFGE. Para os isolados não relacionados a surtos, foram obtidos STs e perfis de PFGE diversos. Os resultados obtidos mostraram que o esquema de MLST usado pode ser adequado para tipagem molecular de isolados de M. abscessus.