Resumo

El virus de la anemia infecciosa del salmón (ISAV) genera grandes pérdidas económicas en la industria salmonicultora. A la fecha, el éxito de las estrategias de prevención y control de este virus es incierto. Uno de los principales mecanismos de control es la vacunación contra ISAV, no obstante, dado la limitada capacidad de respuesta inmunológica adaptativa de los peces, esta estrategia presenta restricciones. Considerando todas las limitaciones que poseen las estrategias de control existentes a la fecha, una posible solución que surge a esta problemática es el uso de los RNA interferentes (RNAi), los cuales representan una alternativa muy promisoria contra las enfermedades virales. Para implementar esta estrategia, se diseñaron RNAi contra zonas conservadas del genoma de ISAV y se probó su efectividad para apagar la expresión génica del virus. Aquellos RNAi que permitieron un apagamiento de más de un 50% en la expresión de genes virales fueron clonados en un vector e introducidos en una cepa de E. coli no patógena capaz de sintetizar antivirales RNAi. Consecutivamente, se analizó experimentalmente diversos parámetros operacionales para identificar bajo qué condiciones se logra mejorar el crecimiento de esta cepa bacteriana. Se identificó que los parámetros de agitación, razón de inóculo y cambios en la concentración de triptona y glicerol permitieron aumentar la biomasa total. Manejando estos parámetros se mejoró el rendimiento en biomasa en un 86%, considerando como línea base la biomasa obtenida empleando condiciones estándares de cultivo. Posteriormente, se estudiaron las condiciones necesarias para aumentar la producción de los RNAi antivirales, de modo de obtener la mejor razón RNAi/biomasa. Esta razón óptima se obtuvo utilizando IPTG 2mM, como un inductor de la producción de RNAi, y aplicando este inductor a las 2 horas luego del inicio del crecimiento exponencial bacteriano. Los resultados indican que conociendo la cinética bacteriana, modificando algunos parámetros de crecimiento y empleando la inducción por IPTG, es posible optimizar la relación RNAi/biomasa obteniendo fábricas bacterianas eficientes en la producción de antivirales RNAi contra ISAV.