Resumo

As lipases juntamente com outras enzimas hidrolíticas representam 75% das formulações enzimáticas comercializadas. O gênero Aspergillus é destaque na obtenção de enzimas e contem muitas espécies com potencial lipolítico. O fungo A. japonicus, isolado na usina de compostagem de Coimbra (MG), foi selecionado pelo grupo como uma fonte promissora de novas lipases. A intenção do trabalho foi determinar propriedades catalíticas das lipases produzidas por essa fonte microbiana. O fungo foi cultivado em meio líquido Czapek-dox modificado e suplementado com óleo de girassol por 96 horas a 30^oC. Após a fermentação, os meios de cultivo foram filtrados para separação do sobrenadante e do micélio livre. A atividade enzimática e quantidade de proteínas totais presentes no sobrenadante e no extrato obtido pela maceração do micélio foram determinadas pelo método do pNPP (para-nitrofenilpalmitato) e Bradford, respectivamente. As enzimas foram purificadas pela combinação das etapas: precipitação om sulfato de amônio 60% de saturação e cromatografia de exclusão molecular (extracelular); cromatografia de troca aniônica e exclusão molecular (intracelular). As enzimas parcialmente purificadas foram caracterizadas quanto à especificidade pelo substrato, parâmetros cinéticos e temperatura e pH ótimos de atuação. A lipase extracelular foi purificada 3,91 vezes com rendimento de purificação igual a 44,2%, e a lipase intracelular 23,5 vezes com 23,4% de rendimento. O perfil de especificidade das enzimas foi similar e verificamos como tendência maior atividade enzimática em função do aumento da cadeia carbônica do substrato (C2-C16). A lipase extracelular teve preferência pelo substrato de cadeia carbônica C14 (p-nitrofenilmiristato-pNPM), enquanto a intracelular pelo substrato pNPP de cadeia carbônica C16. Os parâmetros cinéticos aparentes de Michaelis-Menten determinados utilizando-se o substrato sintético pNPP confirmaram maior eficiência catalítica para as lipases intracelulares com razão kcat/KM igual a 3,68 (min^-1/μM) superior a observada para as lipases extracelulares (1,22 (min^-1/μM)). Ambas as enzimas são alcalinas com pH ótimo de atuação na faixa 8-9 e temperatura ótima na faixa 40-45^oC. As lipases estudadas possuem propriedades adequadas para aplicações industriais no que diz respeito à eficiência catalítica, pH e temperatura ótimos de atuação.