Resumo

A associação benéfica da bactéria Gluconacetobacter diazotrophicus com a planta de cana-de-açúcar despertou um grande interesse da comunidade científica, o que culminou no seqüenciamento genômico da estirpe PAL5T dessa espécie. Conseqüentemente abriram-se diversas oportunidades para a aplicação biotecnológica da bactéria principalmente em relação aos efeitos de promoção de crescimento e agente de controle biológico na cultura da cana. Neste sentido foi identificada a ORF GDI_0415 que codifica uma provável bacteriocina do grupo das Linocinas M18. A função dessa ORF foi demonstrada através da interrupção da expressão dessa GDI_0415, o que levou à não produção de halos de inibição de crescimento da bactéria fitopatogênica Xanthomonas albilineans. Com o objetivo de explorar o papel no controle de bactérias fitopatogênicas, o gene de aproximadamente 825pb foi amplificado do genoma de G. diazotrophicus PAL5T utilizando a técnica de PCR e clonado no vetor comercial pGEM-T-esay. Após confirmação do sucesso do procedimento de clonagem, o fragmento de DNA contendo a ORF GDI_0415 foi subclonado no vetor de expressão pBBR1p264 que apresenta um promotor de expressão constitutiva. Este novo plasmídeo, denominado pBBR1p264GDi0415, foi transferido para células de Escherichia coli. A expressão proteica de 6 clones transformantes foi avaliada usando a metodologia de SDS-PAGE, e os resultados sugerem que o gene da bacteriocina pode estar sendo expresso em quatro clones, pelo surgimento de uma banda com aproximadamente 28 KDa, conforme esperado. A atividade antagônica desses clones contra a bactéria X. albilineans assim como de transferência do plasmídio pBBR1p264GDi0415 para a estirpe PAL5 de G. diazotrophicus deverão indicar o potencial antimicrobiano do gene no controle de bactérias fitopatogênicas.