Resumo

O cultivo de fungos filamentosos, visando à produção de proteases, em biorreator é complexo e diversas variáveis estão envolvidas, como transferência de massa e calor, taxa de aeração e pH. Fungos filamentosos isolados na Antártica, produtores de proteases são de grande interesse industrial em diversos setores como as indústrias de alimentos e de biocombustíveis. Por este motivo, o presente trabalho teve por objetivo avaliar a produção de protease através do cultivo do fungo Acremonium sp. L1-4B recuperado a partir de uma amostra de líquen terrestre do continente Antártico. Para o inicio do cultivo em biorreator foi preparado o pré-inóculo em Erlenmeyers de 500 mL contendo 150 mL de meio de cultura (pH 6,0) contendo peptona 2%, caseína 2%, extrato de levedura 1% e caldo Sabouraud 3%, esse inóculo foi padronizado com 5 discos de micélio de 6 mm de diâmetro obtidos da extremidade das colônias cultivadas por 10 dias a 15 ºC em placas contendo meio PDA (Potato Dextrose Agar). O ensaio foi conduzido em biorreator modelo BioFlo 115 (New Brunswick) com capacidade de 3L, contendo 1,5L do mesmo meio de cultura do pré-inóculo. O cultivo transcorreu durante 168 h, com pH inicial 6,0, temperatura de 15 ºC, agitação de 400rpm e aeração em 2vvm, condição com melhor kLa. A cada 24h foram coletadas amostras, as quais foram centrifugadas a 9000g por 10 minutos a 4 ºC. O sobrenadante obtido foi filtrado com papel filtro Whatman 1 e analisado qualitativamente quanto à atividade de proteases. Para isso, foi 50µL do extrato foram inseridos em poços de 6mm de diâmetro em placas de Petri contendo skimm Milk e Agar e as placas foram incubadas a 15 ºC. A produção de protease foi observada após 48h de cultivo, sendo avaliada a partir do surgimento de um discreto halo de hidrólise da proteína do leite presente no meio de cultura. Em 96 h de cultivo o meio de cultura apresentou alta viscosidade e após 120 h o meio de cultivo voltou à forma líquida. O aumento na viscosidade do meio de cultivo é função dos subprodutos excretados para o mesmo, pois foi observado decaimento no valor de pH e concomitante aumento na produção de protease. A produção de proteases em biorreator é promissora e novos estudos serão delineados visando otimização e escalonamento da produção enzimática, bem como a purificação e a caracterização da protease produzida pelo fungo Acremonium sp. L1-4B