Resumo

Introdução e objetivo: Nos últimos anos alguns progressos na área de biotecnologia têm sido obtidos na área de recombinação e produção de proteínas heterólogas, utilizando microrganismos como modelo, dentre eles, as leveduras. A Pichia pastoris tem se destacado por apresentar amplas vantagens nos processos de produção de biomoléculas. A menor parte funcional destes anticorpos são os scFv que são constituídos pelas variáveis das cadeias leve (VL) e pesada (VH) através de um ligante polipeptídico. Estes fragmentos apresentam forte especificidade e, por consequência, configuram uma opção terapêutica promissora para diferentes tipos de tratamentos. Para isso, processos adequados de produção e de purificação precisam ser desenvolvidos, nesse trabalho avaliamos o efeito da variação da temperatura e da concentração de indutor (metanol) na produção do fragmento de anticorpo scFv. Foram avaliados três cultivos, o primeiro nas condições de 0,5% de indutor, temperatura de indução de 10°C e tempo de cultivo de 24 horas, obteve-se produção de fragmento de anticorpo scFv de 33,2 mg/L. No segundo cultivo, as condições foram de 0,5% de indutor, temperatura de indução de 30°C e tempo de 24 horas, obteve-se produção de fragmento de anticorpo scFv de 35 mg/L. E no terceiro cultivo (referência), avaliou-se 1% de indutor, temperatura de indução de 20°C e tempo de cultivo de 28 horas, obteve-se produção de fragmento de anticorpo scFv de 13,2 mg/L. Todas as condições de cultivo foram realizadas com um kLa de 96,12h-1. Resultados e discussão: Nas condições avaliadas, a maior produção de fragmento de anticorpo scFv (35 mg/L) foi obtida na condição de 30°C, observou-se também que a menor concentração de indutor (0,5%) influenciou positivamente na produção do fragmento de anticorpo. Tal efeito pode estar relacionado com o efeito de repressão catabólica pelo promotor AOX na presença de altas concentrações de substrato, isto é, com concentração de indutor de 1,0% observou-se repressão, ou seja, menor produção de fragmento de anticorpo scFv (13,2 mg/L). Conclusão: Os resultados obtidos permitem inferir que o sistema de expressão de proteínas heterólogas pelo promotor AOX em P. pastoris constitui-se como excelente ferramenta biotecnológia para produção de biomoléculas que requerem ajustes pos-traducionais por sistemas eucarióticos.